一种新型合成水蛭肽纤溶动力学研究

目的 研究水蛭肽Hirulog-s影响单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用考察新型合成水蛭肽的纤溶作用特性。方法 构筑单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（pro-uPA）和纤溶酶原（plg）相互活化反应体系,添加Hirulog-s成反应体系不同浓度,比较pro-uPA和plg相互活化反应体系中纤溶酶（plm）作用于pro-uPA反应的酶促反应动力学常数（Km,kcat）,分析Hirulog-s对plm作用于pro-uPA反应的催化速率及亲和性。纤溶活性作用检测采用底物酶促反应法,酶促反应动力学常数的测定基于基于单链尿激酶型纤溶酶原激活剂激活纤溶酶原的反应。 结果 在plm作用于pro-uPA的反应体系中,30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat值增大了3.1倍,Km值减小了1.6倍,表明Hirulog-s可以显著提高plm的最大催化速率同时增强亲和性。30 μmol·L-1 Hirulog-s与对照相比kcat/Km值增大了4.75倍,表明Hirulog-s明显提高了plm的催化效率。通过活性对比表明Hirulog-s的纤溶活性强于水蛭肽Hirulog-1。 结论 Hirulog-s促进单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和纤溶酶原相互活化作用而发挥纤溶作用,新型合成水蛭肽从酶促反应动力学参数显示出优良的纤溶作用特性。     

西红花球茎和根的代谢轮廓及其对pH的响应

目的:比较西红花球茎和根代谢轮廓的差异以及分析浇灌不同pH值的营养液对西红花球茎和根代谢组的影响。方法:用80%的甲醇提取球茎和根的代谢物,采用超高效液相色谱仪联用四级杆串联飞行时间质谱仪(UHPLC-Q-TOF-MS)在正负极离子模式下采集数据。根据精确分子量和保留时间鉴定化合物,用Mass Profinder软件提取每个化合物的峰面积,然后用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等方法做统计分析。结果:在西红花球茎和根中共检测到162个化合物,包括氨基酸、碳水化合物和黄酮类物质等。绝大部分黄酮类物质的含量在根中较高,而天冬酰胺和精氨酸等的含量在球茎中较高。不同pH值的溶液对球茎代谢组具有特异性的影响,同时也发现相对于pH7组,有些氨基酸(如亮氨酸和酪氨酸)的含量在pH3和pH5组中升高而在pH9组中下降。不同pH溶液也能显著改变西红花根的新陈代谢。结论:西红花根和球茎黄酮类化合物的含量差别较大。用酸性营养液浇灌有利于西红花球茎氨基酸的积累,将有助于来年幼苗的生长。     

虾类原肌球蛋白的Balb/c小鼠致敏动物模型构建研究

目的虾类主要过敏原原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)的Balb/c小鼠致敏动物模型的构建及Tm的低过敏性处理效果评价。方法本研究选用Balb/c小鼠,设立常见致敏蛋白卵清蛋白(OVA)组、虾主要过敏原Tm组、经无花果蛋白酶消减处理的Tm(Tm-E)和阴性对照PBS组,将各组样品与氢氧化铝佐剂(3∶1)混合后采用腹腔注射方式以构建Tm致敏动物模型,每次注射时间间隔为1周。第4天采集小鼠血清,通过ELISA评价血清中IgE和IgG抗体的效价变化。结果 OVA和Tm刺激38 d后产生大量IgE和IgG抗体;阴性对照组在整个刺激过程中其血清中不含有IgE和IgG抗体;Tm-E组在致敏24 d、38 d时其IgE的OD值分别较Tm组低77.83%和64.06%(P<0.01)。结论本研究成功构建了虾主要过敏原Tm的致敏动物模型,此外发现无花果蛋白酶解处理方式(酶活与底物比13.6 U/g,35℃酶解10 min)可有效降低Tm的过敏原性。